Como qualquer trabalho de investigação, antes de avançarmos para a componente laboratorial, existe uma série de conhecimentos prévios a adquirir, com o intuito de permitir o desenvolvimento da parte prática. Antes da visita ao laboratório de cultura vegetal in vitro da UTAD foram dedicadas aulas à abordagem teórica, cujos PDF ficam desde já disponíveis (clicar nas imagens das apresentações).
A investigação e introdução teórica à técnica de cultura in vitro vegetal
Preparação do Meio de Cultura e Esterilização
Para ficar a conhecer alguns dos passos do trabalho laboratorial realizado durante esta etapa clique nas setas para ilustrar a sequência cronológica dos procedimentos.
Procedimentos
Prática Laboratorial
 Material de laboratórioMaterial utilizado para a preparação da solução de trabalho |  MS DuchefaMeio Murashige & Skoog liofilizado |  Preparação do Meio de CulturaMeio de cultura Murashige & Skoog (1962) |
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 Preparação da solução de trabalhoPreparação da solução de trabalho e adição de sacarose |  Ajuste do valor de pHAcerto do valor de pH a 5.6 recorrendo a solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,1M ou ácido clorídrico (HCl) |  Medidor de pHAjuste do valor de pH até atingir-se o valor pretendido de 5,6 |
 Pesagem do AgarPesagem do Agar numa balança de precisão |  Adição do AgarO Agar destina-se a dar a consistência necessária ao meio de cultura in vitro utilizado nesta atividade |  Meio de culturaMeio de cultura em garrafas de 500 ml destinado ao autoclave para esterilização a 120 ºC, durante 15 minutos |
 Solução de trabalhoSolução de trabalho após esterilização pelo autoclave. Chama-se à atenção para o papel indicador que confirma a esterilização do material |
Manipulação do Material Biológico Ex-Vitro e Desinfeção
Para a realização deste trabalho escolhemos sementes de Fisális, Morangueiro de Jardim e de Bosque, Cultivares de Oliveira e castas de Vinha da região. Eis alguns dos passos realizados nesta etapa...
(clique nas setas para conhecer a cronológica dos procedimentos)
 Seleção dos ExplantesEscolha dos explantes de videira para posterior desinfeção |  Preparação de Explantes de OliveiraSeleção dos exemplares da cultivar de Oliveira para posterior desinfeção |  Desinfeção de ExplantesProcesso de desinfeção de explantes de Oliveira (Bical) |
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 Sementes de FisálisSementes e Frutos de Fisális - Espécie tropical de elevado interesse comercial e nutritivo |  Sementes de MorangueiroSementes de Morangueiro do Bosque e de Jardim |  Desinfeção de SementesDesinfeção de sementes de Morangueiros de jardim, bosque e Fisális |
Manipulação do Material Biológico em Câmara de Fluxo Laminar
No processo de cultura in vitro pretende-se apenas a propagação do material vegetal, pelo que as condições de manipulação do material biológico têm de ser realizadas em boas condições de assépsia, reduzindo a probabilidade de propagação de Fungos (resultantes da germinação de esporos transportados pelo ar para o meio de cultura), bom como de Bactérias transportadas pelo ar e/ou pelo investigador que manipula o material.
 Sementes de FisálisPassagem das sementes de Fisális para o meio de cultura in vitro na câmara de fluxo laminar e identificação do frasco de cultura |  Esterilização à chamaEsterilização do material de laboratório à chama, destinado a manipular o material biológico |  Material Biológico - VideiraPreparação do material biológico de Videira |
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 Explante em Meio de CulturaIntrodução do material biológico - explantes de videira - no meio de cultura |  Material Biológico - OliveiraTrabalho em câmara de fluxo laminar para manipulação do material biológico destinado à cultura in vitro |  Explante de OliveiraManipulação do material biológico desinfectado em câmara de fluxo laminar |
 Explantes de OliveiraColocação dos explantes de Oliveira em meio de cultura |
